MTTアッセイとMTSアッセイの違い

MTTおよびMTSアッセイは、invitroで細胞生存率を測定するために使用される2種類のアッセイです。それらは、細胞増殖および細胞毒性に対する試験分子の効果を明らかにするのに役立ち、細胞の生存率に影響を及ぼします。さらに、MTTアッセイはMTSアッセイよりも時間がかかります。

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MTTアッセイとは

MTTアッセイは、ハイスループットスクリーニング（HTS）に適した96ウェルフォーマット用に開発された最初の均一細胞生存率アッセイです。このアッセイの原理は、生細胞に存在する酵素、NAD（P）H依存性細胞酸化還元酵素の作用によってテトラゾリウム色素を還元する細胞の能力に基づいて細胞生存率を決定することです。ここで、MTTアッセイに使用されるテトラゾリウム色素は、黄色の3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドです。上記の酵素作用は、細胞内および細胞表面近くならびに培養培地中に沈殿した結晶の形態の不溶性ホルマザン生成物の形成をもたらす。ただし、ホルマザン生成物の量は吸光度を測定することで測定されるため、不溶性の結晶を最初に可溶化してから、570nmで吸光度を測定する必要があります。

図1：MTT反応

ただし、MTTアッセイでは使用する材料とステップが少なくなりますが、この方法にはいくつかの欠点があります。このアッセイは、細胞の懸濁には適していません。さらに、サンプル中に存在する沈殿したタンパク質や細胞破片は、吸光度測定を妨害し、アッセイの感度と精度を低下させる可能性があります。また、アッセイ時間とサンプルに存在する細胞数は、細胞タイプごとに最適化する必要があります。

MTSアッセイとは

MTSアッセイは、新しいタイプのテトラゾリウム色素を使用するため、MTTアッセイの新しい方法であり、最終的には水性の可溶性ホルマザン生成物が得られます。ここで、MTSアッセイで使用されるテトラゾリウム色素は、3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-5-（3-カルボキシメトキシフェニル）-2-（4-スルホフェニル）-2H-テトラゾリウムです。可溶性ホルマザン色素の形成は、中間電子受容体として機能するフェナジンメトサルフェート（PMS）の存在下で起こり、NADHから電子を移動してテトラゾリウム色素を還元し、可溶性ホルマザン生成物を形成します。

図2：MTTプレート

可溶性ホルマザン生成物を直接形成すると、MTTアッセイのホルマザン生成物の可溶化ステップが減少します。したがって、MTSアッセイはより効率的で、時間もかかりません。また、培地の除去やホルマザン生成物の可溶化中に発生する可能性のある細胞喪失などの潜在的なエラーも除去します。さらに、得られたホルマザン生成物は色が濃くなります。これにより、アッセイの感度と精度が向上します。

MTTアッセイとMTSアッセイの類似点

MTTアッセイとMTSアッセイの違い

意味

MTTアッセイは、細胞代謝活性を評価するための比色アッセイを指し、MTSアッセイは、MTTアッセイで必要とされる断続的なステップなしで、細胞培養に直接試薬を追加する便利さを提供する「ワンステップ」MTTアッセイを指します。したがって、これがMTTアッセイとMTSアッセイの主な違いです。

アッセイで使用されるテトラゾリウム色素の種類

さらに、MTTアッセイはMTT（3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド）を使用しますが、MTSアッセイはMTS（3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-5）を使用します。 -（3-カルボキシメトキシフェニル）-2-（4-スルホフェニル）-2H-テトラゾリウム）。

ホルマザン製品の溶解度

また、MTTアッセイのホルマザン生成物は不溶性ですが、MTSアッセイのホルマザン生成物は可溶性です。したがって、これはMTTアッセイとMTSアッセイの重要な違いです。

吸収の測定

時間

時間もMTTアッセイとMTSアッセイの違いです。 MTSアッセイは、MTTアッセイよりも消費時間が短くなります。

感度と精度

さらに、MTTアッセイは、細胞の破片や沈殿したタンパク質が吸光度測定に干渉する可能性があるため、感度と精度が低くなりますが、MTSアッセイは、より暗いホルマザン生成物の形成により、感度と精度が高くなります。

費用

MTTアッセイとMTSアッセイのもう1つの違いは、コストです。 MTTアッセイはMTSアッセイよりも安価です。

結論

MTTアッセイは、細胞増殖と細胞毒性に対する試験分子の効果を評価するために細胞生存率を測定するための古典的なアッセイです。ただし、MTTアッセイで得られたホルマザン生成物は不溶性です。したがって、このアッセイでは、ホルマザン生成物を可溶化するための追加のステップが必要です。対照的に、MTSアッセイは細胞生存率を測定するための新しい方法であり、新しい種類のテトラゾリウム塩を使用します。これにより、可溶性ホルマザンが生成され、MTTアッセイ手順の1ステップが削減されます。したがって、MTSアッセイは、MTTアッセイと比較した場合により効率的です。したがって、MTTアッセイとMTSアッセイの主な違いは、ホルマザン生成物の特性です。

リファレンス：

1. Riss TL、Moravec RA、Niles AL、他。細胞生存率アッセイ。 2013年5月1日[2016年7月1日更新]。 In：Sittampalam GS、Coussens NP、Brimacombe K、他、編集者。アッセイガイダンスマニュアル[インターネット]。 Bethesda（MD）：Eli Lilly&Companyおよび国立先進トランスレーショナル科学センター。 2004-。ここで入手可能。