ニトロセルロースとPVDFメンブレンの違いは何ですか

NS 主な違い ニトロセルロースとPVDFメンブレンの間は ニトロセルロース膜はより高いタンパク質結合能力を持っていますが、PVDF膜は比較的低いタンパク質結合能力を持っています。 さらに、タンパク質分子は疎水性相互作用を介してニトロセルロース膜に結合し、タンパク質分子は疎水性相互作用と双極子相互作用の両方を介してPVDF膜に結合します。さらに、ニトロセルロースメンブレンはPVDFメンブレンよりも感度が高くなっています。

ニトロセルロースとPVDFメンブレンは、ゲル電気泳動によって分離されたタンパク質を転写するためにウエスタンブロットで使用される2種類のメンブレンです。一般に、ブロッティングにおける膜の主な機能は、タンパク質フラグメントを保持する物理的な足場として機能することです。

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ニトロセルロース膜とは

ニトロセルロースメンブレンは、ウエスタンブロッティングに使用される最初のタイプのメンブレンの1つです。それは瞬間的でほとんど不可逆的であるため、それはまだこの技術の最も人気のある選択です。また、ニトロセルロース膜は容易に水和されます。ただし、ストリッピング、リプロービング、または過酷な化学処理には適していません。支持されたニトロセルロース膜は、それらの不活性な支持構造が強度と弾力性を高めるので、セットの選択肢の1つです。

図1：電気泳動転写

さらに、ウエスタンブロッティングでは、ゲル上のタンパク質フラグメントが電気泳動転写と呼ばれるプロセスでニトロセルロース膜に転写されます。このプロセスの背後にある原理は、負に帯電したタンパク質がアノードに向かって移動することです。

PVDFメンブレンとは

PVDFメンブレンは、ウエスタンブロッティングで使用されるもう1つのタイプのメンブレンです。ニトロセルロースメンブレンと比較すると、タンパク質結合能が高くなっています。したがって、これにより検出の感度も向上します。ただし、感度が高くなると、発現量の少ないタンパク質が検出されるため、バックグラウンドが高くなります。

図2：ニトロセルロースメンブレン

ニトロセルロースとPVDFメンブレンの類似点

ニトロセルロースとPVDFメンブレンの違い

意味

ニトロセルロースメンブレンとは、ウエスタンブロットでタンパク質を固定化するために使用される粘着性のメンブレンを指します。一方、PVDFメンブレンは、高い結合能力を持つタンパク質転移のためにウエスタンブロットで使用される他のタイプのメンブレンを指します。

体格的特徴

ニトロセルロース膜はもろくて壊れやすいのに対し、PVDF膜は物理的に耐久性があります。

耐薬品性

ニトロセルロースメンブレンは化学的に耐性がありませんが、PVDFメンブレンは化学的に耐性があります。

プレウェッティング

ニトロセルロースメンブレンはメタノールで事前に湿らせる必要がありますが、PVDFメンブレンは事前に濡らす必要はありません。

タンパク質結合能力

タンパク質の相互作用

タンパク質は、疎水性相互作用を介してニトロセルロース膜に結合しますが、疎水性相互作用と双極子相互作用の両方を介してPVDF膜に結合します。

SDS

ニトロセルロースメンブレンは、トランスファーバッファーにSDSを必要としません。これにより、低分子量タンパク質の結合が強化され、メンブレンを介したタンパク質の過剰トランスファーが防止され、SDSがPVDFメンブレンへのタンパク質のブロッティング効率が向上します。

ウエスタンブロッティングでの使用法

低分子量タンパク質にはニトロセルロースメンブレンを使用し、高分子量タンパク質にはPVDFメンブレンを使用しています。

感度

さらに、ニトロセルロースメンブレンは比較的感度が低く、PVDFメンブレンは結合能力が高いため感度が高くなっています。

バックグラウンド

ニトロセルロースメンブレンは感度が低いためバックグラウンドが低くなりますが、PVDFメンブレンは発現の低いタンパク質の検出感度が高いためバックグラウンドが高くなります。

ストリッピングとリプロービング

これらに加えて、ニトロセルロースメンブレンはストリッピングとリプローブが困難ですが、PVDFメンブレンは疎水性が高いためストリッピングとリプローブが容易です。

その他の用途

ニトロセルロースメンブレンは、核酸（<300 bp）の分析、アミノ酸分析、およびドット/スロットブロッティングに使用され、PVDFメンブレンは、タンパク質配列決定、アミノ酸分析、および固相アッセイシステムに使用されます。

結論

ニトロセルロースメンブレンは、ウエスタンブロットで重要なタイプのメンブレンです。ただし、タンパク質結合能力と感度は比較的低くなっています。また、背景が低くなります。また、主に高分子量タンパク質の分離に使用されます。 PVDFメンブレンは、高分子量タンパク質の分離のためにウエスタンブロットで使用されるもう1つのタイプのメンブレンです。さらに、この膜は比較的高いタンパク質結合能力と感度を持っています。ただし、より高いバックグラウンドが生成されます。したがって、ニトロセルロースとPVDFメンブレンの主な違いは、タンパク質結合能力と感度です。