シングル消化プラスミドとダブル消化プラスミドの違いは何ですか

NS 主な違い 単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの間はそれです 単一の制限酵素は単一の消化されたプラスミドをもたらしますが、2つの異なるタイプの制限酵素は二重に消化されたプラスミドをもたらします。 さらに、外来DNAフラグメントの挿入は、単一消化プラスミドでは両方の方向で発生する可能性がありますが、外来DNAフラグメントの挿入は、二重消化プラスミドでは適切な方向でのみ発生します。

単一消化プラスミドと二重消化プラスミドは、組換えDNA技術で組換えDNAを生成するために使用される2種類のプラスミドです。

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単一消化プラスミドとは何ですか

単一消化プラスミドは、単一の制限酵素のみで消化されるプラスミドの一種です。したがって、このプロセスは単一消化と呼ばれます。一般に、組換えDNA技術で使用されるプラスミドには、特定の制限酵素に対する単一の制限部位しか含まれていません。したがって、1回の消化で環状プラスミドが線形になり、1つのDNAフラグメントが生成されます。このDNAフラグメントの両端は互いに互換性があります。したがって、インサートとのその後の結紮中に自己結紮を受ける可能性があります。

図1：単一消化プラスミド

ここでは、プラスミドと互換性のある末端を生成するために、インサートも同じ制限酵素で消化する必要があります。したがって、ライゲーションは、5 'から3'の方向と3 'から5'の方向の2つの可能な方向で発生します。ただし、プロモーター領域と同じ方向のインサートは転写を受ける可能性があります。したがって、この方向は適切な方向として知られています。先に進む前に、PCRまたは生化学的アッセイのいずれかによって形質転換されたコロニーをスクリーニングすることにより、適切な配向を有する組換えプラスミドを選択する必要があります。

二重消化プラスミドとは

二重消化プラスミドは、2つの制限酵素で二重消化されるプラスミドです。ここで、この反応は単一のチューブで実行することができます。両方の消化の制限部位は、プラスミドの制限認識部位内で発生します。したがって、二重消化反応も単一のDNAフラグメントをもたらします。しかし、両端はそれぞれ異なる制限酵素によって生成されます。したがって、これらの端は互いに互換性がなく、自己結紮を受けません。

図2：二重消化プラスミド

最も重要なことは、インサートの端を消化して適切な方向にライゲーションすることにより、インサートを二重消化プラスミドと適切な方向にライゲーションできることです。したがって、二重消化されたプラスミドは、適切な配向を有する組換えプラスミドのみを生成し、これにより、その後の配向の選択が不要になる。これにより、組換えDNA製造手順からの完全なステップが削減されるため、時間を節約できます。

シングル消化プラスミドとダブル消化プラスミドの類似点

シングル消化プラスミドとダブル消化プラスミドの違い

意味

単一消化プラスミドとは、単一の制限酵素によって消化されたプラスミドを指し、二重消化プラスミドとは、2つの異なる制限酵素によって消化されたプラスミドを指します。これらの定義は、単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの主な違いを説明しています。

終了

単一消化プラスミドでは、同じ制限酵素で消化すると両端が生成されますが、二重消化プラスミドでは、異なる制限酵素で消化すると両端が生成されます。したがって、これは単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの重要な主な違いです。

セルフライゲーション

さらに、セルフライゲーションは、単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの主な違いです。単一消化されたプラスミドの末端は、自己結紮のために互いに適合性があるが、二重消化されたプラスミドの末端は、自己結紮のために互いに適合性がない。

重要性

組換えプラスミドの種類

単一消化プラスミドは、3種類のプラスミドを生成できます。反対方向の2つの組換えプラスミドと、インサートのないセルフライゲーティングプラスミドです。一方、二重消化されたプラスミドは、適切な方向にある1種類の組換えプラスミドしか生成できません。したがって、これは単一消化プラスミドと二重消化プラスミドのもう1つの主な違いです。

時間の節約

単一消化プラスミドの組換えフラグメントは、適切な配向のために選択する必要がありますが、二重消化プラスミドは、外来DNAフラグメントの適切な配向を保証します。したがって、二重消化プラスミドは、単一消化プラスミドではなく、組換えDNA技術の時間を節約します。

結論

単一消化されたプラスミドは単一の制限酵素で消化され、その結果、自己ライゲーションと互換性のある末端が得られます。さらに、外来DNAフラグメントとのライゲーションは、両方の方向で発生する可能性があります。したがって、適切な方向の組換えプラスミドを選択する必要があります。一方、二重消化されたプラスミドは、2つの異なる制限酵素で消化されます。したがって、両端はセルフライゲーションに対応していません。さらに、外来DNA断片は、二重消化されたプラスミドと適切な方向にライゲーションすることができます。したがって、単一消化プラスミドと二重消化プラスミドの主な違いは、消化のタイプとインサートの向きです。