NS 主な違い サザンノーザンブロッティングとウエスタンブロッティングの間は、 サザンブロッティングにはDNAの同定が含まれ、ノーザンブロッティングにはRNAの同定が含まれますが、ウエスタンブロッティングにはタンパク質の同定が含まれます。

サザン、ノーザン、ウエスタンは、サンプル中の特定のDNA、RNA、またはタンパク質分子を検出するために使用される3つのブロッティング技術です。ブロッティング中に、高分子はゲルからメンブレンに転写され、検出に役立つ特定の核酸または抗体と結合します。

抗体、DNA、電気泳動、ノーザンブロッティング、RNA、タンパク質、サザンブロッティング、ウエスタンブロッティング

サザンブロッティングとは

サザンブロッティングは、DNAの混合物中の特定のDNA配列を検出するために使用される技術です。サザンブロットの基本的な手順は以下のとおりです。

電気泳動 –ゲル電気泳動により、サイズに基づいてDNAサンプルを個別のバンドに分離します。

移行 –転写中、ニトロセルロースメンブレンがゲルと接触して配置され、DNAバンドが毛細管現象によってメンブレン上に移動します。

特定の配列の検出 –メンブレン上のターゲット配列は、ハイブリダイゼーションプローブと呼ばれる特定の標識オリゴヌクレオチド配列とハイブリダイズします。ハイブリダイゼーションプローブは短く、サイズが100〜500 bp、一本鎖DNA分子です。ハイブリダイゼーションバッファーの温度と塩濃度に依存するストリンジェンシーは、ハイブリダイゼーションに影響を与えます。高温および低塩濃度によって定義される高ストリンジェンシーはハイブリダイゼーションの特異性を増加させ、低温および高塩濃度によって定義される低ストリンジェンシーは特異性を減少させる。

図1：サザンブロッティング

サザンブロッティングの主な目的は、サンプル中の特定のDNA配列を検出することです。この手法は、DNAフィンガープリント、親子鑑定、被害者の識別、および犯罪者の識別に使用されます。また、RFLP（制限酵素断片長多型）、遺伝子再構成、遺伝病、感染因子の変異と同定において、特定の遺伝子の同定にも役立ちます。

ノーザンブロッティングとは

ノーザンブロッティングは、RNAの混合物中の特定のRNAを検出するために使用される技術です。ノーザンブロットの基本的な手順は次のとおりです。

電気泳動 –サイズに応じてRNAサンプルを個別のバンドに分離します。

移行 –毛細管現象により、ゲル内のRNAバンドがメンブレンに転写されます。

特定の配列の検出 –ターゲットRNA配列は、DNAで構成された標識オリゴヌクレオチドプローブとのハイブリダイゼーションによって検出されます。

図2：ノーザンブロッティング

ノーザンブロッティングはサンプル中の特定のRNA配列を特定できるため、遺伝子発現研究に使用できます。また、病気の診断にも役立ちます。

ウエスタンブロッティングとは

ウエスタンブロットは、タンパク質の混合物中の特定のアミノ酸配列を検出するために使用されるブロッティング技術です。ウエスタンブロットの基本的な手順は以下のとおりです。

電気泳動 –個々のタンパク質は、SDSPAGEによってサイズに基づいてバンドに分離されます。

移行 –ゲル内のタンパク質バンドは、ブロッティングによってメンブレンに転写されます。

特定のタンパク質の検出 –タンパク質が分離されたメンブレンは、特定のタンパク質にのみ結合する一次抗体とともにインキュベートされます。一次抗体の検出には、西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）やアルカリホスファターゼなどの酵素で標識された二次抗体が使用されます。基質とインキュベートすると、酵素作用により、膜上の特定の領域への抗体の結合が視覚化されます。

図3：ウエスタンブロッティング

ウエスタンブロッティングは、プロテインブロットまたはイムノブロッティングとも呼ばれます。サンプル中のタンパク質の数、血清中の細菌とウイルスの存在、および血清中のHIV抗体の存在を識別できます。また、欠陥のあるタンパク質を検出することもできます。さらに、ウエスタンブロッティングは、B型肝炎、クロイツフェルトヤコブ病、ライム病、およびヘルペスの最も信頼のおける検査です。

サザンノーザンブロッティングとウエスタンブロッティングの類似点

サザンノーザンブロッティングとウエスタンブロッティングの違い

意味

サザンブロッティングは、DNAの特定の配列を特定するための手順を指し、ノーザンブロッティングは、相補的DNAとのハイブリダイゼーションによってRNAの特定の配列を検出するために使用されるサザンブロット手順の適応を指し、ウエスタンブロッティングは、特定のアミノを特定するために使用されるブロッティング手順を指します。 -タンパク質の酸配列。

によって開発された

サザンブロッティングは1975年にエドワードM.サザンによって開発されました。ノーザンブロッティングは1979年にアルワインと彼の同僚によって開発され、ウエスタンブロッティングは1979年にスタンフォード大学のジョージスタークのグループによって開発されました。

分子が検出されました

サザンブロッティングは特定のDNA配列を検出し、ノーザンブロッティングは特定のRNA配列を検出し、ウエスタンブロッティングは特定のタンパク質を検出します。

ゲル電気泳動

サザンブロッティングにはアガロースゲル電気泳動が含まれ、ノーザンブロッティングには変性ホルムアルデヒドアガロースゲルが含まれ、ウエスタンブロッティングにはSDSPAGEが含まれます。

ブロッティング法

サザンブロッティングとノーザンブロッティングはどちらも毛細管移動を伴い、ウエスタンブロッティングは電気的移動を伴います。

プローブ

サザンブロッティングはDNAプローブを使用し、ノーザンブロッティングはcDNAプローブを使用し、ウエスタンブロッティングは一次および二次抗体を使用します。

応用

サザンブロッティングは、特定の遺伝子配列を特定するため、およびDNAフィンガープリントで使用されます。ノーザンブロッティングは遺伝子発現解析に使用され、ウエスタンブロッティングは疾患診断に使用されます。

結論

サザンブロッティングは特定のDNA配列を識別し、ノーザンブロッティングは特定のRNA配列を識別し、ウエスタンブロッティングはサンプル内の特定のタンパク質配列を識別します。したがって、3つのブロッティング技術の主な違いは、検出する高分子のタイプです。

リファレンス：

1.「サザンブロッティング：原理、手順、および応用-」オンライン生物学ノート、2017年12月4日、こちらから入手可能2。 Kochunni、Deena T、およびJazirHaneef。 「ノーザンブロッティング：原理、手順、およびアプリケーション。」生物学試験4U、こちらから入手可能3。 「ウエスタンブロッティング技術：原理、手順、および応用-。」 BIOLOGY ONLINE NOTES、2017年12月4日、こちらから入手可能

画像提供：

1.「図170105」CNXOpenStax –（CC BY 4.0）CommonsWikimedia2経由。 Ilewieszoośmiornicachによる「ノーザンブロット図」– Commons Wikimediaによる自作（CC BY-SA 4.0）3。Cawangによる「WesternBlotting」– Commons Wikimediaによる自作（CC0）