トリプシンは、ペプチドのC末端にあるリジンとアルギニンの残基を切断するセリンプロテアーゼです。 接着細胞を培養容器の表面から放出するために、細胞培養で最も広く使用されている酵素です。 トリプシンは、培養で増殖したほとんどの細胞型で容易に許容されます。その活性は、培地に血清を加えることで簡単に中和することができます。トリプシンのこれらの2つの機能は、細胞培養での使用を容易にします。一般的に、トリプシンはEDTAとともに細胞培養に添加されます。細胞培養におけるトリプシンの役割は、この記事で説明されています。

対象となる主要分野

1.トリプシンとは –定義、機能、機能 2.トリプシンは細胞培養でどのように機能しますか –細胞培養におけるトリプシンの役割

重要な用語：接着タンパク質、細胞接着、消化酵素、トリプシン、トリプシン化

トリプシンとは

トリプシンは、多くの脊椎動物の消化器系のタンパク質を分解する消化酵素です。膵液に含まれています。トリプシンは、ペプチドのカルボキシ末端のリジンおよびアルギニン残基を切断します。ただし、これら2つのアミノ酸の後にプラリネが続く場合は切断されません。トリプシンの活性は多くの生物工学的プロセスで使用されており、トリプシンの作用は トリプシン処理 またはトリプシンタンパク質分解。トリプシンの結晶構造を図1に示します。

図1：トリプシン

トリプシンの作用に最適なpHは7.6-8.5です。一般に、フェノールレッドは、上記のpH範囲を監視するためにトリプシンアッセイで使用されます。フェノールレッドは、このpH範囲でピンクがかった色になります。トリプシンアッセイはドライアイスで実施されます。

トリプシンは細胞培養でどのように機能しますか

原形質膜上のタンパク質は、細胞の正常な生理学的活動の維持に不可欠なさまざまな機能を担っています。カドヘリンファミリーなどの一部の原形質膜タンパク質は、細胞骨格タンパク質を細胞外マトリックスにリンクするアンカーとして機能する接着タンパク質です。これは、細胞接着と細胞移動を助けます。原形質膜内の接着タンパク質を図2に示します。

図2：細胞接着タンパク質

細胞培養では、トリプシンを培地に添加して、接着タンパク質を消化することにより、接着細胞を培養容器表面から放出することができます。トリプシンはまた、接着タンパク質の消化を通じて凝集体から細胞を放出します。 EDTAは、培地中の2価イオンをキレート化するためにトリプシンとともに細胞培養にも添加されます。カルシウムイオンとマグネシウムイオンは、トリプシンの作用を阻害する可能性があります。最終的に、トリプシンは細胞培養から個々の細胞を取得するのに役立ち、細胞の下流処理を容易にします。

結論

トリプシンはペプチドを消化する光分解酵素です。トリプシンは接着タンパク質を消化し、細胞を培地に放出するため、個々の細胞を得るために細胞培養で広く使用されています。

リファレンス：

1.「哺乳類細胞における細胞継代培養中のトリプシン誘発プロテオーム変化」。 Journal of Biomedical Science、BioMed Central、2010年5月11日、こちらから入手できます。

画像提供：

1.「1UTN」ユーザー別：DrKjaergaard–自作：PDBファイル1UTNから。 Commons Wikimedia 2を介してPyMol（パブリックドメイン）で作成されました。英語版ウィキペディアのZabMilenkoによる「CellAdhesion」– Commons Wikimediaを介してCommonsHelper（パブリックドメイン）を使用して、PremeditatedChaosによってen.wikipediaからCommonsに転送されました。