コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの違い

NS 主な違い コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの間は、コロニーハイブリダイゼーションは、所望の遺伝子を有する細菌コロニーの選択に使用される方法であるのに対し、プラークハイブリダイゼーションは、所望の遺伝子を有するファージの選択方法である。さらに、コロニーハイブリダイゼーションはプラスミドまたはコスミドベースのライブラリーのスクリーニングに使用でき、プラークハイブリダイゼーションはファージライブラリーのスクリーニングに使用できます。

コロニーとプラークのハイブリダイゼーションは、ゲノムまたはcDNAライブラリーのスクリーニングに使用される2つの手法です。彼らはまた呼ばれます コロニーリフト と プラークリフト それぞれ。

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コロニーハイブリダイゼーションとは何ですか

コロニーハイブリダイゼーションは、目的のDNA配列を持つ細菌コロニーの選択に使用されるスクリーニング方法です。とも呼ばれます コロニーブロットハイブリダイゼーション、コロニーリフト また レプリカ平板法。それは高密度でメッキされたコロニーのスクリーニングを可能にします。コロニーハイブリダイゼーションの元の手順は、GrunsteinとHognessによって最初に開発されました。まず、細菌のコロニーを膜に形質転換し、細菌のコロニーを溶解して、核酸を露出させることができます。次に、露出した核酸を変性させることにより膜に固定し、放射性プローブとハイブリダイズさせます。

図1：コロニーハイブリダイゼーション法

コロニーは、単一の細菌細胞から無性生殖によって発生した細菌のクラスターです。したがって、特定のコロニー内のすべての細菌細胞は、同じ遺伝的構成と形質転換された遺伝物質を持っています。一般的に、細菌はプラスミドまたはコスミドベクターの助けを借りて形質転換されます。

プラークハイブリダイゼーションとは

プラークハイブリダイゼーションは、組換えファージのスクリーニング方法です。これは、1977年のBentonとDevisによるコロニーハイブリダイゼーションの修正版です。この方法は、 プラークリフト。プラークハイブリダイゼーション手順はコロニーハイブリダイゼーション手順と同様であり、プラークをニトロセルロース膜に接触させることによってプラークを持ち上げます。次に、核酸が露出されてメンブレンに固定され、目的のプローブとハイブリダイズします。

図2：寒天プレート上のプラーク

プラークは、特定のバクテリオファージがその領域の細菌細胞の溶解によって生成する寒天プレート上の透明なゾーンです。ニトロセルロースメンブレンに転写されるDNAの量が少ないため、プラークハイブリダイゼーションはより少ないバックグラウンドシグナルを生成します。

コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの類似点

コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの違い

意味

コロニーハイブリダイゼーションは、所望の遺伝子を有する細菌コロニーを選択する方法を指し、プラークハイブリダイゼーションは、組換えファージの同定に使用されるスクリーニング方法を指す。

によって開発された

コロニーハイブリダイゼーションはGrunsteinとHognessによって最初に開発されましたが、プラークハイブリダイゼーションは1977年にBentonとDevisによって最初に開発されました。

ライブラリの種類

コロニーハイブリダイゼーションはプラスミドまたはコスミドベースのライブラリーの同定を含み、プラークハイブリダイゼーションはファージライブラリーの同定を含みます。

リフト数

コロニーは1回持ち上げることができ、プラークは数回持ち上げることができます。

バックグラウンド信号

結論

コロニーハイブリダイゼーションは、プラスミドまたはコスミドベクターで作製されたライブラリー内の細菌コロニーのスクリーニング方法です。一方、プラークハイブリダイゼーションは、ファージライブラリーにおけるバクテリオファージのスクリーニング方法です。コロニーとプラークのハイブリダイゼーションの主な違いは、各方法でスクリーニングされるライブラリーのタイプです。

リファレンス：

1.カクソネン、アンナ。「微生物群集分析のための分子的アプローチ。」浸出– BioMineWiki、2006年4月20日、ここから入手可能2。デール、J W、およびPJグリーナウェイ。「プラークハイブリダイゼーションによる組換えファージの同定。」分子生物学の方法（ニュージャージー州クリフトン）、米国国立医学図書館、ここで入手可能