NS 主な違い 逆相クロマトグラフィーと疎水性相互作用クロマトグラフィーの違いは、 逆相クロマトグラフィー（RPC）はより疎水性の高い媒体を使用するため、相互作用が強くなりますが、疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）は、逆相クロマトグラフィーの媒体と比較して疎水性の低い媒体を使用します。.

逆相クロマトグラフィーと疎水性相互作用クロマトグラフィーは、クロマトグラフィー媒体の疎水性表面と生体分子の表面の疎水性パッチとの間の相互作用に依存する2つのクロマトグラフィー技術です。

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逆相クロマトグラフィーとは

逆相クロマトグラフィー（RPC）は、タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチドなどの生体分子の精製と分析に使用されるクロマトグラフィー技術です。高分解能の分離が得られ、ペプチドマッピングと純度チェックに最適です。 RPCは、ペプチドおよびオリゴヌクレオチドの最終研磨でより頻繁に使用されます。

固定相として使用できる疎水性媒体には、主に2つのタイプがあります。炭素鎖で覆われたシリカビーズと、裸の疎水性ポリマーです。カラムには、サンプルが適用される充填層の形で疎水性媒体が充填されています。トリフルオロ酢酸（TFA）などのイオンペア剤を移動相に添加して、疎水性相互作用の形成を促進することができます。最初は5％アセトニトリルなどの有機修飾剤を使用し、アセトニトリルの％を増やすと溶出を開始できます。

図1：逆相クロマトグラフィー理論

疎水性が低い/極性が高い生体分子が最初に溶出し、疎水性が高い分子は後で溶出します。 RPCは、最高の分解能を備えたクロマトグラフィー技術です。

疎水性相互作用クロマトグラフィーとは

疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）は、中程度の条件下での疎水性に基づく生体分子の分離に使用されるもう1つの手法です。これは、サンプルを初期サンプル濃度とクリーンアップで硫酸アンモニウム沈殿にさらす必要がある場合に、タンパク質を精製するための理想的な手法です。硫酸アンモニウム沈殿中の塩分レベルの上昇は、疎水性成分間の相互作用を増加させます。

図2：疎水性相互作用に対する高塩濃度の影響

HICの疎水性媒体は、アルキル基またはアリール基を含むリガンドでコーティングされた球状粒子の不活性マトリックスで構成されています。疎水性相互作用は、適度に高い塩濃度（通常、1〜2Mの硫酸アンモニウムまたは3MのNaCl）で発生します。スタートバッファーは、不純物を洗い流しながら、目的のタンパク質が培地に結合することを保証します。溶出バッファーには低塩濃度が含まれているため、タンパク質と固定相の間の相互作用が弱まります。

逆相クロマトグラフィーと疎水性相互作用クロマトグラフィーの類似点

逆相クロマトグラフィーと疎水性相互作用クロマトグラフィーの違い

意味

逆相クロマトグラフィー（RPC）は、混合物中の分子の疎水性に基づく最高分解能の分離技術を指し、疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）は、疎水性に基づく一種の分離技術を指しますが、比較的穏やかな条件下で動作します。

疎水性

RPCはより疎水性の条件下で動作し、HICは比較的穏やかな疎水性の条件下で動作します。

相互作用

逆相クロマトグラフィーは、分子と固定相の間のより強い相互作用をもたらし、有機修飾剤による溶出中に逆転させる必要がありますが、HICは、固定相と分子の間の適度に高い相互作用をもたらします。

疎水性媒体

RPCは、炭素鎖で覆われたシリカビーズ、または裸の疎水性ポリマーのいずれかを使用しますが、HICは、アルキル基またはアリール基を含むリガンドでコーティングされた球状粒子の不活性マトリックスを使用します。

開始バッファー

RPCの開始バッファーはトリフルオロ酢酸（TFA）を使用しますが、HICの開始バッファーは適度に高い塩濃度を使用します。

溶出

アセトニトリルの割合が増えるとRPCで溶出が始まり、塩濃度が下がるとHICで溶出が始まります。

解像度

逆相クロマトグラフィーは、RPCと比較した場合、HICの分離能が低い一方で、最高の分離能を備えたクロマトグラフィー技術です。

アプリケーション

RPCはタンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチドの分離に使用され、HICは主にタンパク質の精製に使用されます。

結論

逆相クロマトグラフィーは、疎水性の高い条件下で動作する最高分解能のクロマトグラフィー技術です。ただし、HICは中程度の疎水性条件下で動作します。 RPCとHICは、疎水性に基づく2種類の分離技術です。 RPCとHICの主な違いは、各手法で使用される疎水性の程度です。

リファレンス：

1.疎水性相互作用と逆相クロマトグラフィー：原理と方法。 GE Healthcare、2006年。ここで入手可能

画像提供：

1. Nategmによる「逆相グラジエント溶出概略図」– Commons Wikimediaによる自作（CC BY-SA 4.0）2。英語ウィキブックスのDaliakによる「Hicsalt」–en.wikibooksからCommonsに転送。 （パブリックドメイン）コモンズウィキメディア経由